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生物素(维生素 B7 )检测试剂盒

检测项目:营养成分

适用样本:乳粉

规格
96T/盒
产品介绍
概述

适用于奶粉中添加生物素(维生素 B7)含量的定量分析。 该试剂盒可进行 96 次测定。

检测步骤

1、标准品配制 

1) 打开无菌水瓶盖:沿着箭头方向向上推开蓝色盖帽,逆时 针拉开铝塑盖,取下整个盖帽,然后打开瓶塞,将瓶塞内 侧朝上放置。 

2) 打开生物素标准品瓶盖,取 x mL 无菌水加入标准品瓶中 (x 值见标准品瓶包装标签),盖上瓶盖,振荡使标准品 充分溶解,即为标准品工作液。

3) 取 6 个无菌管(1.5 或 2.0mL),将标准品工作液按照下 表进行稀释。标准品必须现配现用。 标准曲线 μg/100g 无菌水 (μL) 标准品工作 液(μL) 总体积 (μL) 空白:0 500 + 0 = 500 标准品 1:0.08 480 + 20 = 500 标准品 2:0.24 440 + 60 = 500 标准品 3:0.4 400 + 100 = 500 标准品 4:0.56 360 + 140 = 500 标准品 5:0.72 320 + 180 = 500 *标注曲线中已经包含样品 40 倍的提取稀释倍数。 

2、检测培养基的配制 

1) 打开培养基瓶盖,用无菌镊子取出干燥剂并丢弃。 

2) 将 10mL 无菌水(必须取自试剂盒中)加入生物素检测培 养基瓶中,盖紧瓶盖,振荡混匀。 

3) 保证瓶盖密闭的前体下,95℃水浴加热 5min,然后快速 冷却至室温(低于 30℃)。 

4) 使用 0.22μm 无菌滤膜过滤全部培养基,用 15mL 无菌离 心管收集全部滤液。 

5) 取出冻干菌株,沿着箭头方向向上推开蓝色盖帽,逆时 针拉开铝塑盖,取下整个盖帽,轻轻打开瓶塞,将瓶塞 内侧朝上放置;向菌株瓶内加入 1mL 无菌水(必须取自 试剂盒中),用移液枪吹打混匀,取其中的 Y mL(Y 值 见菌株包装瓶标签)加入过滤后的培养基中,振荡混匀, 即为检测菌液(检测菌液须现配现用)。 注:如果培养基在处理的过程中出现较大体积的损失时, 加入的冻干菌株体积需要做相应比例的调整。为杜绝实验室污 染,菌株瓶中剩余的菌再用瓶塞密封,及时清理出实验室或者 高压灭菌处理;制备的检测菌液如有剩余,也需要及时清理出 实验室或者高压灭菌处理。 

3、检测步骤 

注:加入微孔板中的样品必须为无菌样品(使用试剂盒中 提供的无菌水进行稀释)。 

1) 取出所需数量的微孔条置于微孔架上,将剩余微孔板条 放回铝箔袋中密封,2-8℃储存。 

2) 依次将 140μL 标准品或样品、140μL 检测菌液加入微孔 中(用标准品或样品溶液润洗枪头),然后用粘胶薄膜盖 好微孔条(揭开粘胶薄膜的保护层,用手或压舌板将粘胶 薄膜压平,使其充分封闭微孔板条)。 注:保证粘胶薄膜和微孔的封闭性,特别注意微孔的边缘 部分。 

3) 在 37℃培养箱中避光孵育 44-48 小时。 

4) 轻轻来回颠倒混匀微孔板,使菌液充分混匀,然后用一 只手将微孔条固定于微孔架上,另一只手自右上方沿对 角揭开粘胶薄膜,静置 2min 待气泡全部消去(较难消去 的小气泡用移液枪吸出)后用酶标仪在 610-630nm 或540-550nm 下测量浑浊度。 注:孵育完成后,微孔板可在冰箱中保存的最长时间为 48h,然后用酶标仪读数。

注意事项
1) 试剂盒应在 2-8℃储存,产品过期后请勿使用。 2) 加入微孔板中的样品必须无菌,样品稀释时必须使用试 剂盒中提供的无菌水。样品提取后必须在无菌的环境中进 行操作,且实验中需要的其他耗材也必须无菌。 3) 检测培养基会刺激眼睛、皮肤和黏膜,应小心使用。 4) 试验完成后必须按照规章对微孔条进行处理(如高压灭 菌)。 5) 为确定样品中是否存在抑制因素,应进行回收率测定。 提取之前,向样品中加入已知浓度的生物素溶液,回收率 应约为 80-120%。当回收率较低时,表明存在抑制因素, 应增加样品稀释倍数以消除抑制因素的影响。
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